همسانه سازی و انتقال ژن لوسیفراز حشره شب تاب به بنفشه آفریقایی (saintpaulia ionantha)

آنزیم لوسیفراز حشره شب تاب (luc) یکی از مهم ترین آنزیم های صنعتی است که به طور وسیعی در زمینه های مختلف پزشکی، علوم گیاهی و بیولوژی سلولی و مولکولی کاربرد دارد. این آنزیم، به دلیل داشتن خصوصیاتی هم چون حساسیت بالا، تکرارپذیری مطلوب و قابلیت اندازه گیری کمی آن، کاندیدای بسیار مناسبی در زمینه تصویربرداری های بیولومینسانس در شرایط طبیعی و در سیستم های گزارشگر به منظور بهینه سازی سیستم های انتقال ژن و تولید موجودات تراریخت می باشد. تحقیق حاضر جهت همسانه سازی و انتقال ژن لوسیفراز حشره شب تاب گونه ایرانیl. turkestanicus با نشر نور قرمز در گیاه بنفشه آفریقایی (saintpaulia ionantha) انجام گرفت. خصوصیاتی هم چون داشتن رنگ و شکل متنوع، قابلیت رشد در شرایط اتاق، توانایی گل دهی تحت نور مصنوعی و تکثیر رویشی آسان در تمام فصول سال باعث محبوبیت این گل در میان گل های زینتی شده است. برای جداسازی و تکثیر ژن لوسیفراز (luc)، آغازگرهای مناسب با توجه به توالی های دو انتها، محل های برشی آنزیم های مناسب و توالی افزایش دهنده بیان گیاهی (kozak sequence) طراحی و ژن مورد نظر پس از جداسازی، در ناقل بیانی pcambia1304 همسانه سازی شد. ناقل نوترکیب جدید (pcamluc) با استفاده از بررسی های colony pcr،pcr ، هضم آنزیمی، توالی یابی و همردیف سازی آن در بانک اطلاعاتی (genbank)، مورد تایید قرار گرفت. ژن هدف به کمک باکتری آگروباکتریوم سویه lba4404 به گیاه بنفشه آفریقایی منتقل گردید. گیاهان تراریخت بر روی محیط های کشت انتخابی حاوی آنتی بیوتیک های هیگرومایسین و سفوتاکسیم باززایی شدند. آنالیز گیاهان تراریخت با آزمون pcr، rt-pcr و سنجش لومینومتری انجام گرفت.